人员、产品和交叉污染保护
目的
这些测试确定气溶胶是否保留在安全柜内、外部的污染物是否未进人安全柜的工作区域，以及安全柜中装置之间的气溶胶污染是否减到**小。安全柜以测试时要求的气流流速运行。在试验开始前安全柜启动并运行**少30 min，并连续运行**所有测试完成。
材料和仪器
材料
按YY0569中附录C制备的枯草芽胞杆菌黑色变种芽抱悬浮液和无菌稀释液。
仪器
人员、产品和交叉污染保护试验中主要使用以下仪器：
a) 培养皿(100mm×15mm或150mm×22mm)，含营养琼脂培养基、胰蛋白膝大豆琼脂培养基或其他无抑制剂和添加剂的培养基。
营养琼脂培养基配方：
蛋白胨10g，牛肉膏5g ，氛化钠5g ，琼脂15g ,蒸馏水1L ,除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，pH值调**7.2-7.4，加人琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
胰蛋白胨大豆琼脂培养基配方：
胰蛋白胨 1.5 %，大豆蛋白胨0.5%，氯化钠0.5%，琼脂1.6%；用蒸馏水配制而成，pH值调节为7.2±0.2，经121℃ 高压蒸汽灭菌后备用。
b) 撞击采样器，采样流量在12.3L /min-12.6L /min之间，盛有20m L无菌稀释剂；
c) 狭缝采样器，采样流量为28L /min±1.4L /min；
d) 喷雾器，符合下列要求：
1) 能在5min内释放出1×10
8-8×10
8个枯草芽抱杆菌芽胞；
2) 能释放出94%±6%的单细胞芽胞；
3) 气溶胶喷射速率为0.50m /s±0.05m /s；
喷雾器的校验按YY0569中附录D进行。
e) 干扰圆筒，以下称圆筒，为一外径63m m两端封闭的圆筒，长度由安全柜前后尺寸决定，材质为不锈钢或铝。圆筒用于模拟手臂对安全柜气流的干扰。
人员保护
概述
人员保护测试用微生物法或碘化钾法，仲裁时用微生物法。
微生物法
人员保护试验的微生物法步骤为：
a) 安全柜的气流流速设置为标称值；
b) 喷雾器盛有55mL浓度为5×10
8mL-8×10
8/mL芽抱悬浮液。喷雾器位于安全柜内两侧
壁之间，喷雾器喷嘴的轴线在工作台面上方360 mm处，喷嘴前端在前窗操作口内100 mm处，喷射方向平行于工作台面且正对前窗操作口(见图4)；
c) 圆筒固定在安全柜工作台面上中心位置，一端贴着安全柜的后壁，另一端从安全柜的前窗操作口伸出安全柜**少150mm。圆筒轴线距工作台面70mm(见图5)；6个撞击采样器呈左右对称放置在安全柜前，采样口正对安全柜。其中2个撞击采样器的采样口轴线相距150mm，与
圆筒上沿平齐，采样口前端距安全柜63mm；2个撞击采样器采样口轴线相离50mm，位于距圆筒下沿30mm的水平面上，采样口前端距安全柜63 mm；2个撞击采样器的采样口水平面在工作台面上方360mm处，采样口前端距安全柜50mm，采样口轴线距安全柜中线150mm(见图6、图7) ；一个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下，位于前窗进气格栅上方或下方10mm，使其对进气气流的干扰**小(见图5)；
图4 人员保护试验
图 5 人 员 保 护 试 验
d) 2个狭缝采样器的采样口平面与安全柜工作台面平齐，采样口的垂直轴线在安全柜前方150mm处，各距内侧壁200 mm(见图7)；
e) 测试持续30 min，顺序如表2所示；
f)用一直径47 mm的孔径。22 um滤膜过滤所有撞击采样器的采样液体，于无菌条件下取出滤膜，置于合适的培养基上。有滤膜的培养皿、对照培养皿和狭缝采样器的培养旺在37℃培养。
当培养到24 h-28 h时检查计数。若呈阴性，继续培养**总培养时间达44 h-48 h时检查计数；
g) 新型和重大改型设计的安全柜，将流人气流的流速设置为低于标称值0. 050 m/s±0.0 15m /s，下降气流的流速设置为高于标称值0.050m /s±0.0 15m /s (应拆除对安全柜运行不必要的可拆卸设备，以便设置下降气流流速)，重复上述试验步骤；
h) 新型和重大改型设计的安全柜，将流人气流和下降气流的流速设置为低于标称值0. 050 m/s±0.015 m/s (应拆除对安全柜运行不必要的可拆卸设备，以便设置下降气流流速)，重复上述试验步骤。
图6 人员保护试验
图7 人员保护试验
表2 人员保护试验操作顺序
|
时间/ mi n |
试验操作 |
|
0 |
启动狭缝采样器 |
|
s |
启动喷雾器 |
|
e |
启动撞击采样器 |
|
11 |
停止撞击采样器 |
|
11 .5 |
停止喷雾器 |
|
30 |
停止狭缝采样器 |
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碘化钾法
气流流速与微生物试验相同，按YY0569中附录E试验。
产品保护
方法
产品保护试验的微生物法按以下步骤进行：
a) 安全柜的气流流速设置为其标称值；
b) 在安全柜的工作台面上排满敞开的琼脂培养皿(见图8)；
图 8 产品 保 护 试 验
c) 圆筒固定在安全柜工作台面上的中心区，一端贴住工作区的后壁，另一端从前窗操作口伸出安全柜**少150 mm，圆筒的轴线高于工作台面70 mm(见图9) ;
d) 将盛有55m L浓度为5X 1 06/m L---8X l Os /m L芽抱悬浮液的喷雾器放在安全柜外，喷雾器喷射轴在安全柜中心并与前窗操作口上沿平齐，喷雾器的喷嘴前端位于前窗操作口外100 mm，喷雾方向平行于工作台面，正对前窗操作口(见图9)；
e) 一个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下，并位于前窗进气格栅上方或下方10 mm，使其对进气气流的干扰**小(见图9)；
f) 启动喷雾器，运行5 min后关闭。喷雾器关闭5 min后盖上琼脂培养皿的盖子；
g) 将培养皿在37.0℃培养。当培养到24 h-28 h时检查计数。如果呈阴性，继续培养**总培养时间达44 h-48 h时检查计数；
h) 对于新型和重大改型设计的安全柜，将流人气流的流速设置为高于标称值0.050 m/s±
0.015m /s，将下降气流的流速设置为低于标称值0.050m /s±0.015m /s(应拆除对安全柜运行不必要的可拆卸设备，以便设置下降气流流速)，重复上述试验步骤。
图 9 产 品 保 护 试 验
交叉污染保护
方法
a) 安全柜的气流流速设置为其标称值；
b) 将盛有55ml浓度为5×10
8/mL-8×10
8/mL的芽抱悬浮液的喷雾器置于安全柜内，紧靠左
侧内壁的中心，喷雾器喷射轴线在工作台面上76mm-130mm处，喷射方向平行于工作台面正对 面的侧壁(见图10)；
c) 按下列方式，将敞开的琼脂培养皿从前**后排列在工作台面上(见图10)：
1) 两排对照培养皿位于喷雾器喷嘴下方；
2) 距喷雾器所在侧壁360mm处放一排培养皿；
3) 距喷雾器所在侧壁360mm外放一排培养皿，如果空间允许则放两排；
d) 启动喷雾器，5min后关闭喷雾器；
e) 15min后盖上培养皿，37.0℃培养。当培养到24 h-28 h时检查计数如果呈阴性，继续培
养**总培养时间达44h -48h 时检查计数；
f) 将喷雾器放于靠右侧内壁中央执行上述步骤。
图 10 防交 叉 污 染 试 验
