生物安全柜的使用

●　正常使用
为维持生物安全柜对柜的正常运行，必须定期检查高效空气过滤器是否有堵塞、泄漏等情况，风量及其平衡情况，以及联锁控制、报警装置的完好性。为对柜内的污染充分稀释，并保持下次正常运行，操作完毕后**少应空转10min。
基于使用安全目的，前部开口高度不能超过额定值，不能随意改变其面积和形状。应特别注意使手、材料、器具等通过前部开口部位的次数**少，在操作开始前就把必要的器具和材料放到适当的位置上。
控制平行于开口部位的室内风速很重要，如果超过开口部位平均风速将影响生物安全柜回风能力，使前窗开口处的隔离效果很快下降，手背能感觉的风速通常已有0.5m/s，而人步行导致的风速很容易达到１m/s，所以应特别控制人员走动引起的干扰气流。
吸附垫
在操作台面放一层贴有吸附材料的塑料薄膜，每日更换，可使操作台面的污染减少到**低限度。
回收容器
在安全柜内应配置回收污染物质的容器。其中吸球（即吸管）用的容器2－3个，污染的玻璃器具和废弃物等用的容器**少4－5个。容器中必须盛足消毒液，如：有效含量为500ppm以上的雅妍酸钠，把污染物质完全浸没。这些回收容器**少每天操作完毕后盖好以防污染。再用时应重新清洗容器或者用新的容器。
柜内实验器材和材料的取出
凡废弃的污染性材料、使用过的包装材料、容器、纸张等废弃物统统收装好或者经高压灭菌器灭菌后拿到缓冲区。
在实验中或完毕后，必须从生物安全柜内取出非活灭的病原体时，应装好放在药液槽中，使容器外侧被消毒后取出，消毒液种类因病原体不同而异。
高效过滤器更换
1）  高效过滤器更换前，一定要将柜内表面及原高效过滤器采用甲醛灭菌。
2）  过滤器更换时，让使用的试验人员在场，以便询问实验时使用的细菌。
3）  手和身体有外伤者不得进行操作，操作人员一定要戴防毒面具和橡胶手套。
4）    取出的过滤器应立即密封放入塑料袋内，再放入纸箱内，使用过的面具、手套也同样处理，然后一起烧毁。
5）  安装新过滤器时，不要随便将头和身体伸到柜内，并高度谨慎操作。
瓶盖
在生物安全柜内使用的瓶子不用橡胶塞，而应使用螺旋盖，开启时可减少气溶胶的发生。
消毒火焰
用火焰消毒是古典的微生物学方法，但是会产生气溶胶，并使柜内气流紊乱，应尽量不使用，而可以用**近研制成功的小型电加热器、无焰管口加热器进行消毒。在不得已使用火焰消毒时，美G建议在安全柜内用手动灯头，日本建议用脚踏式灯头，shou先用小火点燃，然后在脚下将脚蹬开关一踏，主要火焰就被点着。脚蹬开关一旦停止踏时，主要火焰立即熄灭，并且采用不开通风机则不点火的联锁气闸方式，因而也比较安全。
溢出处理
    GB19489—2007《实验室生物安全通用要求》对生物安全柜内溢出时的处理给出了方法：
滴状溢出或体积不足1 mL 的，可简单地用消毒剂擦洗。
大量溢出，则要做特殊的处理
1） 使生物安全柜保持开启状态。
2） 在溢出物上覆盖浸有消毒剂的吸水材料，作用大约10分钟以发挥消毒作用。
3） 在安全柜内对污染的手套消毒后，脱下手套。如果衣服已经污染，也要先脱下消毒。穿戴干净的手套和衣服作如下进一步的清洁工作。
4） 用消毒剂喷洒或擦拭安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧。作用20 min后，擦干消毒剂并将擦拭物置于生物危害袋中。
5) 如果溢出情况需要浸泡接液槽，则不得现场清理接液槽。应报告实验室主管后采用适当的气体消毒方式。
6）将所有清理用物品以及防护服进行高压消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮肤。
7） 立即通知实验室主管。如果溢出物流入安全柜内，可能需要对安全柜进行更为广泛的消毒处理。
● 工作结束后的要求
将安全柜继续运行**少3min来完成“净化”过程。
将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭
每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。
等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟。
 
●　生物安全柜的现场检查
现场检验的时间
在以下时间需要对在用生物安全柜进行现场检查。
1）  安装之后或初次使用之前；
2）  移动后，包括在实验室内移动；
3）  定期检查，**少每年1次或2次；
4）  更换高效空气过滤器后；
5）  高浓度的病原体实验完毕，这些实验材料被大量散落时；
6）  中途变更实验时；
7）  实验中断后又长时间不使用时；
8）  其它必要时候。
 
现场检查的内容
1）  气密性；
2）  高效空气过滤器完整性；
3）  垂直下将其溜溜平均流速及其均匀性；
4）  前部流入气流平均流速及其均匀性；
5）  气流模式；
6）  振动；
7）  接地电阻；#p#分页标题#e#
8）  噪声；
9）  照度；
10）              紫外线强度（操作台面40μw/cm²以上；
11）              生物安全性能；
12）              风机性能。
上述各项检查中的1~5为必须检查项目，根据美G的经验，没有实行这种检查时，常有60%的生物安全柜发生问题。实行检查后，仍然可检出10%~20%的生物安全柜不合格。
 
●　清扫和灭菌
内部清扫
生物安全柜内部清扫是使用环节的重要工作之一。每天作业完成后，吸附垫、移管、回收容器等物件都要拿到安全柜外面去，柜内应为全空状态。然后对操作台内表面用加入含碘界面活性剂的消毒剂檫拭。用于檫拭过的物料要作为污染废弃物处理，安灭菌灯的生物安全柜不要在柜内形成阴影，因为紫外线照射不到的阴影区没有杀菌效果。
甲醛气体的熏蒸消毒
针对生物安全柜自身污染消毒时，一般采用甲醛气体熏蒸。
将生物安全柜密闭起来，日、美标准建议用10000ppm的甲醛气体熏闷2小时，英G标准给出的甲醛浓度只有500ppm，相差如此悬殊的原因还不太明确。但有一点是清楚的，就是采用过多的甲醛会因聚合而析出白色粉末附着在装置内表面，对灭菌后实验研究带来不良影响。
当相对湿度在65%以上，温度在24~40℃时，甲醛气体消毒的效果**好。当生物安全柜内没有吸湿物质时，**大必要水量约为20g／m³。干燥时，甲醛在浓度为7.75%时爆炸，着火点为430℃。由于甲醛的环境标准只有1~2ppm，所以即使稍有泄漏也会超过标准值很多，故应**重视，采取措施。
具体做法：
1）  计算生物安全柜的容积，按10g／m³的比例称出仲甲醛。
2）  在台面放好加热盘或烧杯，盛入仲甲醛，然后放好加湿用水及其热源，并放置好温度计。
3）  把生物安全柜的前部开口和排风口用严实的盖板堵好，在盖板周边**好贴上宽50mm左右的橡胶条。
4）  从外面对加热与加湿用热源进行控制，并具有防止温度过高的控制，随时观察温度计。
5）  当仲甲醛分解掉50%及全部分解完后，为使气体扩散到各个角落，各开动柜内风机3~5s。
6）  当第二次开过风机之后切断加热电源，**少薰闷2小时。推荐的薰闷时间为一晚上。
7）  然后打开排风口，开送风机，**后打开前部开口，取出灭菌器材。
8）  熏蒸后的生物安全柜应空运行2~4小时之后再使用。
生物安全柜的检测
柜体泄漏测试
目的
测试安全柜柜体的防泄漏性能。
仪器
使用的主要仪器有：
a) 压力计，**小量程为-600P a,精确士5P a；
b) 肥皂溶液，由25g /L的软肥皂的微温蒸馏水溶液组成。
压力衰减法
压力衰减法的步骤为：
a) 封好安全柜的前窗和排气孔，使安全柜成为一密封系统；
b) 必要时，移开装饰嵌板和通道上的其他障碍物，将要测试的压力通风系统露出来；
c) 在测试区连接压力计或压力传感器系统以显示内压；
d) 给安全柜增压到500P a，封闭加压空气，30m in后测定压力。允许初始压力下降10%
肥皂泡法
肥皂泡法的步骤为:
a) 封好安全柜的前窗和排气孔，使安全柜成为一密封系统；
b) 必要时，移开装饰嵌板和通道上的其他障碍物，将要测试的压力通风系统露出来；
c) 在测试区连接压力计显示内压；
d) 对安全柜用空气增压，使其压力持续实测值为500P a士10%；
e) 沿安全柜压力通风系统所有焊缝、衬垫、套接处和封口处的外表面喷或涂刷检漏肥皂溶液，
小的泄漏会出现气泡，如果从孔中吹出检测液体而未形成泡，则可能发生大的泄漏，可通过轻微的气流感觉和声音来发现。
高效过滤器完整性
目的
测定安全柜过滤器安装结构(包括下降气流高效过滤器、排气高效过滤器、过滤器外罩和框架)的完整性。
试剂
邻苯二甲酸二辛醋(DOP)或与之相当的液体即可以产生与DOP气溶胶颗粒尺寸分布相同气溶胶颗粒的液体，例如:聚一烯烃(PAO) ,癸二酸二(2一乙基己)酉旨、聚乙二醇以及药物级的轻矿物油。
仪器
——线性或对数刻度的气溶胶光度计，可以将过滤器上游气流中浓度为10I g/L DOP(或相当液体 )多分散气溶胶微粒标示为100%,能检测0.0 01%同一气溶胶微粒。光度计应按其生产商
的使用说明进行校准；
——将气溶胶发生器，压力调****小140k Pa，使用DOP或与之相当的液体发生气溶胶。发生器喷嘴浸人液体的深度应不超过25m m。气溶胶发生器的压力计**大量程为550k Pa，分辨
率和精确度为7 k Pa。发生器压力计由生产厂家校准或按照厂家的使用说明校准。
方法
可以扫描检测的过滤器
扫描检测过滤器的检测按下列步骤进行：
a) 运行安全柜的风机和灯，去掉过滤器的散流装置和保护盖(如果有)。安放气溶胶发生器，将气溶胶导人安全柜，按厂商的说明，产生均匀分布的高效过滤器上游气流。厂商未规定气溶胶的导人位置时，导人气溶胶的方式应确保其在安全柜的气流中均匀分布；#p#分页标题#e#
b) 打开气溶胶光度计，按厂商使用说明进行调整；
c) 对含有气溶胶的高效过滤器上游气流进行测试，证实该浓度气溶胶的光散射强度**少应等于由10 u g /L D OP 产 生的光散射强度；
——如果是线性刻度的光度计，将读数调整为100；
——如果是对数刻度的光度计，将上游气流浓度的读数调整在一个分度对应浓度的1x10^以上；
d) 光度计探头在过滤器下游距过滤器表面不超过25m m,以小于50m m/s的扫描速率移动，使探头扫测过滤器的整个下游一侧和每个组合过滤片的边缘，扫测路线应略微重叠。围绕整个过滤器外围、沿组合过滤片和框架的连接处以及围绕过滤器和其他部件之间的密封处仔细检查。
不能扫描检测的过滤器
对于经管道排气的安全柜，不能进行排气过滤器的扫描检测，过滤器下游气流中气溶胶浓度的检测是在下游气流的管道上钻一直径大约10 mm的孔，将带有硬管光度计探针播人孔中进行检测。